植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個細節

更新時間：2019-09-24

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　　植物Elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物活性氧（ROS）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物活性氧（ROS）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

　　植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個細節：抗原或抗體能吸附于固相載體外表，并堅持其免疫學活性，抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能堅持其免疫學和酶學活性；酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在，并且色彩反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，可根據已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規范曲線并依此計算出不知道樣品中抗體或抗原的濃度。

　　樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。

　　植物Elisa試劑盒采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。

　　標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。

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